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Estandarización de las pruebas de Elisa y Western Blot para la detección de IgA específica contra E. coli en orina

EI presente estudio tuvo el objetivo de estandarizar cualitativamente una prueba de ELISA y de Western Blot para detectar IgA especifica contra E. coli en orina. En la estandarización de la prueba de ELISA los micropocillos fueron recubiertos con una solución de OM-89 de 4 ug/ml. La dilución adecuad...

Descripción completa

Autor Principal: Castillo Bósquez, Sharon Ibeth
Formato: Tesis
Idioma: Español
Publicado: 2016
Materias:
R Medicine (General)
RZ Other systems of medicine
Acceso en línea: http://up-rid.up.ac.pa/85/
http://up-rid.up.ac.pa/85/1/sharon_castillo.pdf
id RepoUP85
recordtype eprints
spelling RepoUP852023-07-20T16:57:14Z http://up-rid.up.ac.pa/85/ Estandarización de las pruebas de Elisa y Western Blot para la detección de IgA específica contra E. coli en orina Castillo Bósquez, Sharon Ibeth R Medicine (General) RZ Other systems of medicine EI presente estudio tuvo el objetivo de estandarizar cualitativamente una prueba de ELISA y de Western Blot para detectar IgA especifica contra E. coli en orina. En la estandarización de la prueba de ELISA los micropocillos fueron recubiertos con una solución de OM-89 de 4 ug/ml. La dilución adecuada del conjugado fue de 1:50,000; la muestra de orina fue utilizada sin diluir; y los tiempos de incubación de la muestra y del conjugado correspondieron a 2 horas y una hora respectivamente. Se seleccionaron 32 controles negativos, con urocultivos negativos y una visible negatividad en pruebas de ELISA para detectar IgA específica contra E. coli en orina en análisis previos. Se obtuvo un punto de corte de 0.779. De 109 muestras de orina analizadas por ELISA, 27 fueron positivas, de las cuales 17 tenían urocultivos positivos por E. coli; nueve tenían urocultivos negativos, y una tenía urocultivo positivo por Klebsiella pneumoniae. De las muestras positivas por ELISA, 15 fueron analizadas por Western Blot. Resultaron todas positivas, obteniéndose reacción contra proteínas de pesos moleculares aproximados de 21kDa a 152kDa. Las más inmunogénicas fueron de aproximadamente 152kDa y de 49kDa. En la literatura se reportaron dos proteínas correspondientes, la ARN polimerasa subunidad beta dirigida por ADN (RpoB) de 151kDa y la Biotin Carboxilasa (accC) de 49kDa. Se concluye que estas pruebas permiten valorar cualitativamente la presencia de IgA específica contra E. coli en orina. Tienen una valiosa aplicación clínica e investigativa para evaluar el efecto del uso de medicamentos e inmunoestimuladores utilizados para tratar infecciones de las vías urinarias, en estudios de seguimiento y/o comparativos. 2016 Thesis NonPeerReviewed text es cc_by_nc_sa_4 http://up-rid.up.ac.pa/85/1/sharon_castillo.pdf Castillo Bósquez, Sharon Ibeth (2016) Estandarización de las pruebas de Elisa y Western Blot para la detección de IgA específica contra E. coli en orina. Masters thesis, Universidad de Panamá. Vicerrectoría de Investigación y Postgrado.
institution Universidad de Panamá
collection Repositorio UP-RID
language Español
topic R Medicine (General)
RZ Other systems of medicine
spellingShingle R Medicine (General)
RZ Other systems of medicine
Castillo Bósquez, Sharon Ibeth
Estandarización de las pruebas de Elisa y Western Blot para la detección de IgA específica contra E. coli en orina
description EI presente estudio tuvo el objetivo de estandarizar cualitativamente una prueba de ELISA y de Western Blot para detectar IgA especifica contra E. coli en orina. En la estandarización de la prueba de ELISA los micropocillos fueron recubiertos con una solución de OM-89 de 4 ug/ml. La dilución adecuada del conjugado fue de 1:50,000; la muestra de orina fue utilizada sin diluir; y los tiempos de incubación de la muestra y del conjugado correspondieron a 2 horas y una hora respectivamente. Se seleccionaron 32 controles negativos, con urocultivos negativos y una visible negatividad en pruebas de ELISA para detectar IgA específica contra E. coli en orina en análisis previos. Se obtuvo un punto de corte de 0.779. De 109 muestras de orina analizadas por ELISA, 27 fueron positivas, de las cuales 17 tenían urocultivos positivos por E. coli; nueve tenían urocultivos negativos, y una tenía urocultivo positivo por Klebsiella pneumoniae. De las muestras positivas por ELISA, 15 fueron analizadas por Western Blot. Resultaron todas positivas, obteniéndose reacción contra proteínas de pesos moleculares aproximados de 21kDa a 152kDa. Las más inmunogénicas fueron de aproximadamente 152kDa y de 49kDa. En la literatura se reportaron dos proteínas correspondientes, la ARN polimerasa subunidad beta dirigida por ADN (RpoB) de 151kDa y la Biotin Carboxilasa (accC) de 49kDa. Se concluye que estas pruebas permiten valorar cualitativamente la presencia de IgA específica contra E. coli en orina. Tienen una valiosa aplicación clínica e investigativa para evaluar el efecto del uso de medicamentos e inmunoestimuladores utilizados para tratar infecciones de las vías urinarias, en estudios de seguimiento y/o comparativos.
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