Estandarización de las pruebas de Elisa y Western Blot para la detección de IgA específica contra E. coli en orina
EI presente estudio tuvo el objetivo de estandarizar cualitativamente una prueba de ELISA y de Western Blot para detectar IgA especifica contra E. coli en orina. En la estandarización de la prueba de ELISA los micropocillos fueron recubiertos con una solución de OM-89 de 4 ug/ml. La dilución adecuad...
| Autor Principal: | Castillo Bósquez, Sharon Ibeth |
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| Formato: | Tesis |
| Idioma: | Español |
| Publicado: |
2016
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| Materias: | |
| Acceso en línea: |
http://up-rid.up.ac.pa/85/ http://up-rid.up.ac.pa/85/1/sharon_castillo.pdf |
| Sumario: |
EI presente estudio tuvo el objetivo de estandarizar cualitativamente una prueba de ELISA y de Western Blot para detectar IgA especifica contra E. coli en orina. En la estandarización de la prueba de ELISA los micropocillos fueron recubiertos con una solución de OM-89 de 4 ug/ml. La dilución adecuada del conjugado fue de 1:50,000; la muestra de orina fue utilizada sin diluir; y los tiempos de incubación de la muestra y del conjugado correspondieron a 2 horas y una hora respectivamente. Se seleccionaron 32 controles negativos, con urocultivos negativos y una visible negatividad en pruebas de ELISA para detectar IgA específica contra E. coli en orina en análisis previos. Se obtuvo un punto de corte de 0.779. De 109 muestras de orina analizadas por ELISA, 27 fueron positivas, de las cuales 17 tenían urocultivos positivos por E. coli; nueve tenían urocultivos negativos, y una tenía urocultivo positivo por Klebsiella pneumoniae. De las muestras positivas por ELISA, 15 fueron analizadas por Western Blot. Resultaron todas positivas, obteniéndose reacción contra proteínas de pesos moleculares aproximados de 21kDa a 152kDa. Las más inmunogénicas fueron de aproximadamente 152kDa y de 49kDa. En la literatura se reportaron dos proteínas correspondientes, la ARN polimerasa subunidad beta dirigida por ADN (RpoB) de 151kDa y la Biotin Carboxilasa (accC) de 49kDa. Se concluye que estas pruebas permiten valorar cualitativamente la presencia de IgA específica contra E. coli en orina. Tienen una valiosa aplicación clínica e investigativa para evaluar el efecto del uso de medicamentos e inmunoestimuladores utilizados para tratar infecciones de las vías urinarias, en estudios de seguimiento y/o comparativos. |
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