Evaluación de la producción de taq polimerasa a partir de cepas clonadas de Escherichia coli (Theodore von Escherich) para la amplificación de ADN vegetal, en el Laboratorio de Biotecnología, UNAN-Managua. Febrero 2017 - Octubre 2018
La Taq polimerasa es una enzima termoestable a altas temperatura indispensable para la implementación de técnicas moleculares fundamentales para el desarrollo de investigaciones biotecnológicas debido a que amplifica fragmentos de ácido desoxirribonucleico (ADN) con una alta fidelidad. Teniendo en c...
| Autor Principal: | López Altamirano, Felix Octavio |
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| Formato: | Tesis |
| Idioma: | Español Español |
| Publicado: |
2018
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| Materias: | |
| Acceso en línea: |
http://repositorio.unan.edu.ni/13725/ http://repositorio.unan.edu.ni/13725/1/F%C3%A9lix%20Octavio%20L%C3%B3pez%20Altamirano.pdf http://repositorio.unan.edu.ni/13725/2/2020.jpg |
| Sumario: |
La Taq polimerasa es una enzima termoestable a altas temperatura indispensable para la implementación de técnicas moleculares fundamentales para el desarrollo de investigaciones biotecnológicas debido a que amplifica fragmentos de ácido desoxirribonucleico (ADN) con una alta fidelidad. Teniendo en cuenta su gran importancia y sus altos costos, el presente estudio planteó como objetivo principal evaluar la producción de Taq polimerasa a partir de cepas clonadas de Escherichia coli (E. coli).
La identidad de las cepas clonadas se verificó mediante su crecimiento selectivo en caldo LB Miller y agar LB Miller con ampicilina (80 mg/ml), la caracterización morfológica de las colonias, tinción de Gram y extracción de ADN plasmídico. El protocolo de producción utilizado como base para la producción de Taq polimerasa corresponde a una modificación del método desarrollado por Bognanni y Lazzarini (2015) cuya variación principal radica en la sustitución de los reactivos descritos por equivalentes disponibles en el Laboratorio.
La verificación de la actividad enzimática se realizó mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) utilizando los primers MTcCIR18 y Y16991 utilizados dentro del conjunto de marcadores internacionalmente establecidos para la caracterización molecular de cacao (Theobroma cacao L.) mediante la metodología de secuencias simples repetitivas (SSR, por sus siglas en inglés) con un rango esperado de amplificación entre 333 y 357 pares de bases (pb). |
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